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國立宜蘭大學 生物技術與動物科學系生物技術碩士班 陳威戎所指導 郭美儀的 探討陽離子抗菌胜肽對多重抗藥性腸毒型大腸桿菌之 抗菌機制並用蛋白質晶片分析其結合標的 （2021），提出耐 斯 CACO關鍵因素是什麼，來自於抗菌胜肽、多重抗藥性、腸毒型大腸桿菌。
而第二篇論文國立屏東科技大學 食品科學系所 邱秋霞所指導 鄭宇捷的 發酵麩皮之乳酸菌篩選及對離乳豬生長之影響 （2018），提出因為有 乳酸菌、發酵麩皮、菌株特性、飼料添加劑的重點而找出了 耐 斯 CACO的解答。
探討陽離子抗菌胜肽對多重抗藥性腸毒型大腸桿菌之 抗菌機制並用蛋白質晶片分析其結合標的
為了解決耐 斯 CACO 的問題，作者郭美儀 這樣論述：
由腸毒型大腸桿菌引起的仔豬離乳後腹瀉是常見的疾病，會造成其死亡並對養豬產業帶來重大的經濟損失。為了治療豬離乳後腹瀉疾病，濫用抗生素導致多重耐藥性 (multidrug-resistance, MDR) 細菌大量產生的問題日益嚴重，迫切需要尋求或開發新的抗菌製劑。抗菌胜肽 (Antimicrobial peptides, AMPs) 為一種新穎抗菌製劑，其富含正電，因此能選擇性地與帶負電的細菌細胞膜作用，達到抗菌的效果。實驗室前人已設計合成並優化出對多重抗藥性腸毒型大腸桿菌 (enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC) 具有抑菌能力的AMPs，本研究目的為探
討AMPs對ETEC的抗菌作用與機制。首先，經由最小抑菌濃度 (Minimal inhibitory concentration, MIC) 實驗找出最有效之AMP，Q4-15a-1，MIC值為 4 μg/mL。動態殺菌曲線試驗證實其在低濃度 (4 μg/mL與 8 μg/mL) 時抑菌, 高濃度 (16 μg/mL與 32 μg/mL) 時殺菌。穿透式電子顯微鏡的結果發現Q4-15a-1的作用下ETEC出現膜裂解與細胞質外流的情況。通過共軛焦顯微鏡搭配螢光染色試驗觀察細胞膜的滲透性，結果表明在Q4-15a-1的作用下，ETEC膜的通透性增加。此外，研究利用螢光FITC標記Q4-15a-1，尋
找胜肽的作用位置, 結果指明Q4-15a-1首先會黏附在細胞膜上，之後累積在細菌體內。通過核酸結合實驗證明Q4-15a-1有能力與核酸結合。為了進一步了解 Q4-15a-1的抗菌機制，與國立成功大學合作共同應用包含了近 4300 種純化之大腸桿菌蛋白質所製備之蛋白質體微陣列晶片，找出141種與Q4-15a-1 結合之標的蛋白質並利用生物資訊的分析工具KEGG pathway, InterPro, GO analysis分析結合標的。接著以豬腸道上皮細胞 (porcine intestinal epithelial cells, IPEC-1) 為感染模型，進行感染並利用即時定量式聚合酶連鎖反應
技術了解Q4-15a-1抗發炎的能力，結果證明Q4-15a-1可以降低發炎因子基因的表現量，有抗發炎的能力。綜上所述，Q4-15a-1是具有潛力替代抗生素的抗菌製劑。
發酵麩皮之乳酸菌篩選及對離乳豬生長之影響
為了解決耐 斯 CACO 的問題，作者鄭宇捷 這樣論述：
中文摘要學號:M10536019論文題目:以乳酸菌發酵麩皮作為離乳豬飼料添加劑之研究總頁數:135學校名稱:國立屏東科技大學 系 (所) 別:食品科學系畢業時間及摘要別:107學年度第一學期碩士論文摘要研究生:鄭宇捷 指導教授:邱秋霞 博士論文摘要內容:乳酸菌為一群能夠忍受腸道環境且能發酵碳水化合物，並於發酵期間能產生多種「益生質」之益生菌，其廣泛應用於發酵飼料，以達到家畜腸道菌相平衡之目的。本研究自發酵麩皮中篩選出乳酸菌株，並經由API 50 CHL及16S rDNA鑑定之，並以電子顯微鏡觀察其外觀形態，接著利用API ZYME enzyme test kits以及探討體外之耐
酸及膽鹽耐受性、生長曲線、抑菌能力以及藥物敏感性測試，評估自行分離之發酵麩皮益生菌之潛力，最後將其製備為發酵麩皮，並且分析其發酵前後之成份變化。四株乳酸菌經鑑定後分別命名為Lactobacillus paraplantarum W1、Lactobacillus pentosus W9、Lactobacillus paraplantarum W27及Lactobacillus pentosus W28，於電子顯微鏡觀察下皆為短桿狀型態，且於MRS broth中培養8小時可達穩定期，而於第24小時進入死滅期。另外四株乳酸菌菌株，皆具有高活性之β-glucosidase、Leucine arylam
idase及Valine arylamidase酵素反應。接著於菌株耐酸性試驗結果顯示，菌株L. paraplantarum W1於pH 2.0之磷酸緩衝溶液中靜置6小時，其存活菌數可達6.74 Log CFU/mL，展現出其優異之耐受性。而在膽鹽耐受性試驗，菌株W1及W27於0.3%膽鹽之MRS broth中24小時，其菌數可達6.96及7.33 Log CFU/mL。而靜置於1%膽鹽環境中24小時後，僅剩W1及W28菌株可維持3.0 Log CFU/mL以上菌數。於抑菌試驗方面，四株乳酸菌對病原菌Escherichia coli ATCC 8739, Salmonella enterica
subsp. enterica BCRC 10747, Staphylococcus aureus BCRC 10451, Salmonella typhimurium及Salmonella choleraesuis皆具有抑制能力，而雖然抑菌效果隨培養時間的增加而減少，但菌株L. paraplantarum W1能夠長時間抑制E. coli，於24小時後抑菌圈亦尚有3.64 ±0.51 mm。於藥物敏感性測試則以六種牧場常見之抗生素測定之，其結果顯示，四株乳酸菌皆不帶有抗藥性基因，且對於青黴素類之Amoxicillin及Ampicillin最為強烈，其於4小時後抑制圈皆可達12 mm以上，其
中對於菌株L. paraplantarum W1可達20 mm以上。最後於成分分析結果顯示，發酵麩皮之粗蛋白、粗脂肪及灰分含量皆無明顯之變化。然而於中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、酸洗木質素、半纖維素及纖維素之含量結果顯示，四株乳酸菌皆能夠顯著地降低中性洗滌纖維及半纖維素之含量，其中菌株 L. paraplantarum W1 能夠降解最多半纖維素，由原先48.37±0.19%下降至39.58±1.12%。另外結果發現，除菌株 L. pentosus W28之外，其餘三株乳酸菌皆能夠降低酸洗木質素從而提高纖維素之含量。最後發酵麩皮中脂肪酸成分結果顯示，麩皮檢測到六種主要之脂肪酸，分別為 己酸 (C
6:0)、十五脂酸 (C15:1)、棕櫚油酸 (C16:1)、硬脂酸 (C18:0)、反式亞油酸甲脂 (C18:2n6t) 及二十碳五烯酸 (C20:5n3)，而其餘微量脂肪酸可能會於乳酸菌發酵後而減少其含量，以至於未達偵測器之定量極限而未檢出。整體而言，乳酸菌株L. paraplantarum W1於模擬腸胃道環境之下，具有不同程度之耐受能力且不具抗藥性基因，並能夠有效地降解麩皮中之纖維素，因此選擇以此作為動物田間試驗之菌株。結果顯示，以乳酸菌菌株L. paraplantarum W1發酵麩皮並餵飼離乳仔豬可顯著性地改善離乳初期之每日日增重及飼料換肉率，其數據分別為230±0.1 g及1.7
4±0.2，另外於糞便中可檢測到較高之總乳酸菌菌數及較少之大腸桿菌群及大腸桿菌。綜觀以上之結果，乳酸菌菌株L. paraplantarum W1為未來可開發作為飼料添加劑之潛力菌株。關鍵字：乳酸菌、發酵麩皮、菌株特性、飼料添加劑